TG16-WS  TDZ5-WS  湘仪离心机 H1850R
当前位置:首页 > 血液中的Exosome内的蛋白浓度离心分析

血液中的Exosome内的蛋白浓度离心分析

[导读]下文中,对血液中的Exosome内的蛋白浓度离心分析,供大家参考。

1 Exosome的电镜观察获得的延边黄牛血浆经过离心机离心和超离心后得到Exosome,所得Exosome经负染在透射电镜下观察其形态为圆形或椭圆形双层膜小囊泡,且中间的密度要低于边缘,在边缘处有脂质双层膜结构,整个Exosome的直径为30~100nm,膜结构完整。

2 Exosome的蛋白定量延边黄牛血液中的Exosome内的蛋白浓度约为2mg/ml,说明Exosome中存在着大量的蛋白质。

3 结论与讨论:延边黄牛的生长效率是影响延边黄牛养殖业发展的关键因素之一。因此,如何提高延边黄牛的生长效率是人们关注的主要焦点。外胞体( Exosome) 是由多种细胞分泌的一种含有多种成分的纳米级小囊泡并存在于不同的细胞和体液中。Exosome的组成成分复杂,含有多种活性成分,如蛋白质、mRNA、miRNA和脂类等,可能参与细胞间通讯交流、免疫调节、信号传递、生长发育和分化等过程。细胞分泌的Exosome可以分泌到体液( 如血浆) 中,因此从血浆中可以获得Exosomes。然而,延边黄牛血液中的Exosome的结构特点及其对延边黄牛生长发育的影响的研究尚未见报道。笔者利用超速离心法从延边黄牛血液中分离到Exosome,并进行了电镜观察和蛋白定量,为进一步研究Exosome对延边黄牛生长影响的研究奠定了基础。

目前,Exosome的提取方法主要有超速离心(利用湖南湘仪离心机进行离心)、磁珠免疫捕获、沉淀或过滤和试剂盒等方法。该试验中主要采用超速离心分离Exosome(用的离心机为H1850,湖南湘仪实验室仪器开发有限公司),虽然该方法有耗时耗力、处理的样品数少等缺点,但采用该方法能制备出干净的Exosome,因此该试验中采用超速离心分离Exosome。目前,鉴定Exosome主要采用电镜和Western blotting等方法。电镜法直观可靠,既可以观察到Exosome的结构,也可以测量其大小,是鉴定Exosome的首选方法。笔者通过电镜技术对延边黄牛血液来源的Exosom 进行超微形态学观察,从电镜负染观察可以看出,与其他来源的Exosome均为圆形或椭圆形双层膜小囊泡,这与其他文献内描述的外胞体形态一致。通过蛋白定量结果表明,Exosome中存在一定浓度的蛋白质。电镜和蛋白定量结果表明,使用超速离心方法能成功从延边黄牛血液中分离到Exosome,从而为进一步研究Exosome对延边黄牛生长轴调控的分子机制提供理论和工作基础。


相关文章