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湘仪离心机公司介绍密度梯度离心法

[导读]密度梯度离心法是使待分离样品在密度梯度介质中进行离心沉降或沉降平衡, 最终分配到梯度中某些特定位置上, 形成不同区带的分离方法,又称区带离心法.

    密度梯度离心不仅可依据样品颗粒的重量及沉降系数进行分离,还可根据样品颗粒的密度、形状等特征进行分离。密度梯度离心在整个离心过程中只使用一种转速,中途无需变更实验参数,而差速离心则需要进行调整转速、重悬反复离心等操作。密度梯度离心适宜分离密度有一定差异的样品,而差速离心则适用于分离混合样品中各沉降系数差别较大的组分。湖南湘仪离心机仪器有限公司介绍密度梯度离心的优点是:分离效果好,可一次性获得较纯的样品颗粒;适应范围广,既可像差速离心法一样分离具有沉降系数差异的颗粒,又能分离有一定浮力密度差的颗粒颗粒会悬浮在相应的位置上形成区带, 而不会形成沉淀被挤压变形,故能最大限度保持样品的生物活性;样品处理量,且可同时处理多个样品对温度变化及加减速引起的扰动不敏感。密度梯度离心法的缺点是:离心时间长、需制备密度梯度介质溶液、对操作者的技能要求较高。密度梯度离心法通常采用吊桶式的水平转子、区带转子及近垂直转子。根据梯度介质的浓度及颗粒在其中沉降的行为, 密度梯度离心又分为速度区带离心和等密度梯度离心

    速度区带离心速度区带离心所采用的密度梯度为预先制备好的、密度变化较为平缓的介质,且该介质的最大密度低于混合样品颗粒的最小颗粒密度。待分离样品添加在梯度介质的液面上,当样品中不同颗粒间存在沉降速度差时( 不需要像差速沉降离心法所要求大的沉降系数差),在一定的离心力作用下,大小、重量不同的颗粒将各自以一定的速度沉降,离心一段时间之后( 通常不超过4h),不同沉降系数的样品颗粒逐渐分开,最后在密度梯度介质中形成一系列分界清晰的不连续区带。沉降系数越大的样品颗粒,沉降速度越快,所呈现的区带也越低,故整个离心过程必须在沉降系数最大的颗粒到达管底前结束。离心时间和离心速度的控制是速度区带离心法成功与否的关键。

    湖南湘仪离心机仪器有限公司得知:速度区带离心法在分离密度相差不大、重量和大小区别较大的样品( 如核糖体等) 时非常有效。但对于大小相近而密度不同的颗粒( 如线粒体溶酶体等) 则不能用此法分离。此法梯度介质常用蔗糖、甘油及( 聚蔗糖) 等 、其中蔗糖最大浓度可达60% , 密度可达1 .28g/cm3, 能够满足绝大部分生物样品的分离需求。


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