关键词: 牛乳酪蛋白; 酪蛋白磷酸肽; 酶解

    1 材料与方法

    1. 1 材料与仪器：牛乳酪蛋白:新西兰恒天然公司;Neutrase:丹麦诺维信公司;胰蛋白酶: 上海紫一试剂厂;2709碱性蛋白酶: 上海丹尼悦生物科技有限公司; LC－1蛋白酶: 实验室自制;胃蛋白酶: 北京市金诺欣成精细化工有限公司;精密pH计( PHS－3C) :上海雷磁有限公司;电子天平:梅特勒有限公司;C5砂心漏斗:广州广测仪器公司;鼓风干燥箱:上海齐欣科学仪器有限公司;超纯水:美国Millipore 公司;高速冷冻离心机:湘仪离心机仪器有限公司。

    1. 2 实验方法

    1. 2. 1 乙醇钡离心沉淀法检测CPP含量：用2mol/L盐酸溶液调节酶解液pH至4.6，将溶液转移至离心管，于湖南湘仪H1850R高速冷冻离心机5℃4000r /min离心30min。将上清液转移至烧杯中，用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.8，转移入50.0mL比色管中，用少量水洗涤杯，一起并入比色管中，控制总量少于23mL。加入4.5mL10% 氯化钡溶液，再用水定容至25.0mL。加入无水乙醇，定容至50.0mL。于5℃冰箱中放置12h以上，取出并将溶液倒入已干燥恒重的C5砂心漏斗直接抽滤，用20mL50%乙醇溶液分23遍洗涤比色管及沉淀物，继续抽滤至滤液澄清。将装有沉淀物的C5砂心漏斗于105℃恒温烘箱内干燥至恒重。

    1. 2. 2 湖南湘仪离心机公司分析酶的种类对CPP得率的影响：称取各种酶5g，分别与牛乳酪蛋白500g混合，用水定容至2L，分别在一下条件下酶解5h(Nrase 温度50°C 之间，pH6.0;胰蛋白酶温度37℃，pH8.0;2709碱性蛋白酶温度50℃，PH值6.0;LC－1蛋白酶温度40℃pH7.0;胃蛋白酶温度37℃pH3.0条件下) ，再用乙醇钡沉淀法测定CPP含量，对其得率进行比较。

    1. 2. 3 LC－1蛋白酶酶解pH对CPP得率的影响：称取牛乳酪蛋白500g，用水定容至2L，加入5gLC－1蛋白酶酶，混合均匀，在温度40℃，pH分别在6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0的条件下，酶解2h，再用乙醇钡沉淀法测定CPP含量。

    1. 2. 4 LC-1蛋白酶酶解温度对CPP得率的影响：称取牛乳酪蛋白500g，用水定容至2L，加入5gLC1蛋白酶酶，混合均匀，在pH8.0，温度分别为30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃的条件下，酶解2h，再用乙醇钡沉淀法测定CPP含量。