关键词：谷朊粉；中性蛋白酶；酶解；多肽；饲料添加剂    

    1 材料与方法

    1.1 材料与设备:谷朊粉（蛋白质质量分数为75%），中性蛋白酶（9.261x105u/g），胃蛋白酶（674u/mg），胰蛋白酶（≥50u/mg）；加热磁力搅拌器，高速冷冻离心机，高效液相色谱仪，超低温冰箱，冷冻干燥机，酸度计，水浴恒温振荡器。试验用其他试剂均为国产分析纯。

    1.2　试验方法

    1.2.1　谷朊粉的酶法水解工艺:称取一定量的谷朊粉，加入到装有一定量的去离子水的烧杯中，在加入的过程中要不断的搅拌，形成一定浓度的谷朊粉悬浮液。将烧杯放到可控温的磁力搅拌器上，待悬浮液的温度达到中性蛋白酶的最适酶解温度时，加入一定量的中性蛋白酶；酶解反应一定时间，期间调节酶解液的PH值，使其处于酶的最适酶解范围。待酶解反应终止时，将酶解液于沸水浴中加热10min，使酶灭活。灭活后迅速用冷水冷却，冷却后将酶解液用超低温冷冻离心机在转速10000r/min、温度4℃条件下离心20min，离心后分别收集上清液和沉淀物。

    1.2.2　水解度的测定:蛋白质水解度是指蛋白质在酶解过程中肽键被断裂的程度。水解度的测量方法采用茚三酮比色法。

    1.2.3　溶解率的测定:蛋白质溶解率是指溶解在上清液中的蛋白占总蛋白质的百分数。蛋白质溶解率＝（上清液中蛋白质含量×上清液体积x10-6x稀释倍数)÷酶解样品中蛋白质总量x100%。蛋白质的测定采用GB/T5511-2008半微量凯氏定氮法。

    本研究拟从谷朊粉酶解物中的蛋白质溶解率、蛋白质水解度、多肽含量以及多肽分子量分布4个方面为切入点，探讨酶解工艺过程中的谷朊粉的添加量、酶解反应时间和酶的添加量的较适水平，同时结合谷朊粉中蛋白质的体外消化情况，最终确定利用中性蛋白酶酶解谷朊粉生产含有合适分子量分布的多肽饲料添加剂的工艺，为工业化生产谷朊粉的酶解物多肽饲料添加剂提供参考。