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离心机在多肽含量的测定实验中的应用

[导读]湖南湘仪离心机仪器有限公司在下文中探讨酶解工艺过程中的谷朊粉的添加量、酶解反应时间和酶的添加量的较适水平,同时结合谷朊粉中蛋白质的体外消化情况。

    1湖南湘仪实验室仪器开发有限公司介绍本次实验所需要的材料以及使用方法。

    1.1材料与设备:谷朊粉(蛋白质质量分数为75%),中性蛋白酶(9.261x105u/g),胃蛋白酶(674u/mg),胰蛋白酶(≥50u/mg);H1850R高速冷冻离心机(湖南湘仪离心机仪器有限公司生产);最高转速为18000r/min,加热磁力搅拌器,高效液相色谱仪,超低温冰箱,冷冻干燥机,酸度计,水浴恒温振荡器。试验用其他试剂均为国产分析纯。

    1.2 本次实验的试验方法

    1.2.1谷朊粉的酶法水解工艺:称取一定量的谷朊粉,加入到装有一定量的去离子水的烧杯中,在加入的过程中要不断的搅拌,形成一定浓度的谷朊粉悬浮液。将烧杯放到可控温的磁力搅拌器上,待悬浮液的温度达到中性蛋白酶的最适酶解温度时,加入一定量的中性蛋白酶;酶解反应一定时间,期间调节酶解液的PH值,使其处于酶的最适酶解范围。待酶解反应终止时,将酶解液于沸水浴中加热10min,使酶灭活。灭活后迅速用冷水冷却,冷却后将酶解液用湖南湘仪H1850R超低温冷冻离心机在转速10000r/min、温度4℃条件下离心20min,离心后分别收集上清液和沉淀物。

    1.2.2湖南湘仪离心机公司介绍多肽含量的测定方法:多肽含量的测定采用双缩脲法。利用酪蛋白为标准品,配成10、8、6、4和2mg/L的溶液,各取其2ml分别与3ml双缩脲试剂混合均匀,放置30min,然后在540nm的波长下测量od值。以酪蛋白浓度作为横坐标,吸光值作为纵坐标,绘制标准曲线。

    湖南湘仪实验室仪器开发有限公司介绍了以上实验的方法,仅供参考。

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