关键词: 烟草蛋白质;材料仪器； 响应曲面法; 优化; 提取工艺

    1 湖南湘仪介绍本次实验所需要的材料与方法

    1．1 材料及设备：低次烟叶，贵州产。整片的晒干烟叶去除叶脉、叶梗，切碎后用粉碎机粉碎，过筛，备用。磷酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、乙酸、乙酸钠、无水乙醇，均为分析纯。牛血清蛋白进口分装( 上海源叶生物科技有限公司) ，考马斯亮蓝G250进口分装( 北京寰宇科创生物科技发展有限公司) 。紫外－可见分光光度计 ，精密pH计( PHS-3C型，上海精密科学仪器有限公司) ，粉碎机( XS－20B多功能粉碎机，上海兆申科技有限公司) ， 电子天平( 北京赛多利公司医疗设备厂) ，匀浆机( OMNI－MIXEＲ变速匀浆机，美国路易企业有限公司) ，恒温水浴锅( THS－10智能型超级恒温水槽，宁波天恒仪器厂) ，高速冷冻离心机( H1850R 型台式高速冷冻离心机，湖南省长沙湘仪离心机仪器有限公司) ，FD－1型冷冻干燥机( 北京博医康试验仪器) 。

    1．2试验方法

    1．2．2烟草蛋白质的提取干烟叶去除叶脉、叶梗，经粉碎机粉碎，过筛，称适当重量的烟粉于烧杯中，加入适当比例的提取缓冲溶液，经搅拌机搅拌混匀，置于湖南湘仪H1850R离心机中在4℃、4800r /min 条件下离心10min进行分离，收集上清液，备用。所有提取试验重复3次，结果取其平均值。

    2 结论：通过单因素试验，确定了在Na2HPO4－KH2PO4缓冲溶液系统提取低次烟叶中的蛋白质。在单因素试验的基础上，应用响应曲面法对提取烟草蛋白质的工艺条件进行优化，最佳的工艺参数为提取缓冲溶液的浓度为0．09mol/L、缓冲溶液与烟草的液料比为10mL/g、提取缓冲溶液的pH值为7.48。在此条件下得到的蛋白质提取率为10．963mg/g。