酪蛋白磷酸肽( CPP) 是以牛乳酪蛋白为原料，通过生物技术制得的具有生物活性的多肽，能有效促进人体对钙、铁、锌等二价矿物营养素的吸收和利用，可用于各种营养、保健食品。

   关键词: 牛乳酪蛋白;酪蛋白磷酸肽;酶解

   1 材料与方法

   1. 1 材料与仪器:牛乳酪蛋白:新西兰恒天然公司;Neutrase:丹麦诺维信公司;胰蛋白酶:上海紫一试剂厂;2709碱性蛋白酶:上海丹尼悦生物科技有限公司;LC-1蛋白酶:实验室自制;胃蛋白酶:北京市金诺欣成精细化工有限公司;精密pH 计(PHS － 3C) : 上海雷磁有限公司;电子天平:梅特勒有限公司;C5 砂心漏斗:广州广测仪器公司;鼓风干燥箱:上海齐欣科学仪器有限公司;超纯水:美国Millipore公司;H1850R高速冷冻离心机:湘仪离心机仪器有限公司。

    1. 2 实验方法

    1. 2. 1 乙醇钡沉淀法检测CPP含量用2mol/L盐酸溶液调节酶解液pH至4.6，将溶液转移至离心管，于湖南湘仪H1850R冷冻离心机中10℃4000r /min离心30min。将上清液转移至烧杯中，用2mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.8，转移入50.0mL 比色管中，用少量水洗涤杯，一起并入比色管中，控制总量少于23mL。加入4.5mL10% 氯化钡溶液，再用水定容至25.0mL。加入无水乙醇，定容至50.0mL。于5℃冰箱中放置12h以上，取出并将溶液倒入已干燥恒重的C5砂心漏斗直接抽滤，用20mL50%乙醇溶液分23遍洗涤比色管及沉淀物，继续抽滤至滤液澄清。将装有沉淀物的C5砂心漏斗于105℃恒温烘箱内干燥至恒重。

    1. 2. 2 酶的种类对CPP得率的影响：称取各种酶5g，分别与牛乳酪蛋白500g 合，用水定容至2L，分别在一下条件下酶解5h( Nrase温度50°C 之间，pH6.0;胰蛋白酶温度37℃，pH8.0; 2709碱性蛋白酶温度50℃，PH值6.0; LC－1蛋白酶温度40℃pH7.0;胃蛋白酶温度37℃pH3.0条件下) ，再用乙醇钡沉淀法测定CPP含量，对其得率进行比较。

    1. 2. 3 LC－1蛋白酶酶解pH对CPP得率的影响：称取牛乳酪蛋白500g，用水定容至2L，加入5gLC－1蛋白酶酶，混合均匀，在温度40℃，pH分别在6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0的条件下，酶解2h，再用乙醇钡沉淀法测定CPP含量。